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              微生物菌種凍干機(jī):液氮超低溫保藏技術(shù)

              時(shí)間:2020-09-11 10:05來(lái)源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊:
              微生物菌種真空凍干機(jī)是在抽真空的狀態(tài)下讓物質(zhì)在低溫下干燥的設(shè)備,主要用于微生物制劑和生物活性物質(zhì)的干燥。菌種保藏室用來(lái)對(duì)微生物進(jìn)行真空凍干保藏。微生物冷凍干燥法是長(zhǎng)期保藏菌種的較好方法之一。因其便于批量生產(chǎn)、長(zhǎng)期保藏成活力高,保藏和運(yùn)輸設(shè)備簡(jiǎn)單而成為一種普遍使用的保藏方法,已廣泛應(yīng)用于保存大部分細(xì)菌、真菌和一些病毒。液氮罐

              1.安瓿管或凍存管的準(zhǔn)備
                 用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管,或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈, 121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。

              2.保護(hù)劑的準(zhǔn)備
                 保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時(shí),應(yīng)注意其濃度,一般采用10-20%甘油。

              3.微生物保藏物的準(zhǔn)備
                 微生物不同的生理狀態(tài)對(duì)存活率有影響,一般使用靜止期或成熟期培養(yǎng)物。分裝時(shí)注意應(yīng)在無(wú)菌條件下操作。

              4.菌種的準(zhǔn)備可采用下列幾種方法:
                 刮取培養(yǎng)物斜面上的孢子或菌體,與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi);
              接種液體培養(yǎng)基,振蕩培養(yǎng)后取菌懸液與保護(hù)劑混合分裝于凍存管內(nèi);
              將培養(yǎng)物在平皿培養(yǎng),形成菌落后,用無(wú)菌打孔器從平板上切取一些大小均勻的小塊(直徑約5-10毫米),真菌取菌落邊緣的菌塊,與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi);
              在小安瓿管中裝1.2-2毫升的瓊脂培養(yǎng)基,接種菌種,培養(yǎng)2-10天后,加入保護(hù)劑,待保藏。

              5.預(yù)凍
                 預(yù)凍時(shí)一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結(jié)到-35℃。
              目前常用的有三種控溫方法:
              —— 程序控溫降溫法,應(yīng)用電子計(jì)算機(jī)程序控制降溫裝置,可以穩(wěn)定連續(xù)降溫,能很好地控制降溫速率。
              —— 分段降溫法:將菌體在不同溫級(jí)的冰箱或液氮罐口分段降溫冷卻,或懸掛于冰的氣霧中逐漸降溫。一般采用二步控溫,將安瓿管或塑料小管,先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小時(shí),然后取出放入液氮罐中快速冷凍。這樣冷凍速率大約每分鐘下降1-1.5℃。
              —— 對(duì)耐低溫的微生物、可以直接放入氣相或液相氮中。

              6.保藏
                 將安瓿管或塑料凍存管置于液氮罐中保藏。一般氣相中溫度為-150℃,液相中溫度為-196℃。
              保藏周期
              一般10年以上。

              7.復(fù)蘇方法
                 從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管,應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速?gòu)?fù)蘇并適當(dāng)搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止,一般約需50秒-100秒。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管,將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

              8.適用范圍
                 各類微生物。
              液氮保藏應(yīng)注意事項(xiàng)
              —— 防止凍傷,操作注意安全,帶面罩及皮手套
              —— 塑料凍存管一定要擰緊螺帽
              —— 運(yùn)送液氮時(shí)一定要用專用特制的容器,絕不可用密閉容器存放或運(yùn)輸液氮,切勿使用保溫瓶存放液氮
              —— 注意存放液氮容器的室內(nèi)通風(fēng),防止過(guò)量氮?dú)馐谷酥舷?br /> —— 防止安瓿管或塑料凍存管破裂爆炸,如液氮滲入管內(nèi),當(dāng)從液氮容器取出時(shí),液態(tài)氮體積膨脹約680倍,爆炸力很大,要特別小心 液氮罐
              —— 注意觀察液氮容器中液氮的殘存量,定期補(bǔ)充液氮。
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