細(xì)胞和胚胎是生物學(xué)實驗中需要大量的超低溫冷藏的樣品,常規(guī)的方法有深冷冰箱儲存法,但是壓縮機(jī)不知什么時候會罷工。所以,采用液氮罐的液氮超低溫儲存方法,就成了業(yè)內(nèi)使用為廣泛的方法和技術(shù)。今天,就給您說說幾個關(guān)于液氮罐保存細(xì)胞和胚胎的知識點。
液氮罐
一、在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的使用 細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程,主要包括準(zhǔn)備、取材、培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇4步。為保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用一196℃液氮溫度,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲基亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,最終保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時間幾乎是無限的。目前美國標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫或細(xì)胞銀行(ATCC)液氮凍存有3200個已經(jīng)過鑒定的細(xì)胞系(1992),其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系和來自不同物種的近75個雜交瘤細(xì)胞株。
二、胚胎冷凍保存技術(shù) 胚胎冷凍保存技術(shù)是指在低溫條件下利用低溫保護(hù)劑保存胚胎的一門技術(shù)。這一技術(shù)是20世紀(jì)后半葉隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的,目前已成為了現(xiàn)代生命科學(xué)研究必備的手段之一。動物胚胎的冷凍保存原理就是因為低溫降低了胚胎內(nèi)的變質(zhì)反應(yīng)速度,溫度越低,胚胎保存時間就越長。目前已研究出多種胚胎冷凍保存方法,包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植冷凍法和玻璃化冷凍法等。
其中玻璃化冷凍法的步驟如下:
①將胚胎在室溫下放人25%玻璃化溶液(VS液)中預(yù)處理15min;
②將預(yù)處理后的胚胎放在高濃度(75%一90%)的VS液中保存20—40min;
③將經(jīng)過兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。
此外還可以用液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質(zhì),均可達(dá)到很好的長期存儲的效果。
常用胚胎和細(xì)胞保存液氮罐為大口徑液氮罐,且好里面配多層凍存管提籃,用來保存細(xì)胞等樣品。大型
液氮罐一罐可保存七八千只凍存管,對于細(xì)胞保存,也是一個超大的容器。