PBMNC分離效果
按照GMP生產(chǎn)規(guī)范和臨床ACI要求分離外周血PBMNC,冷凍保存前細(xì)胞活性為99.6%±0.4%(n=5),與原始血樣比,PBMNC回收率58.4%±6.52%(n=5)。
細(xì)菌和真菌培養(yǎng)陰性,實(shí)現(xiàn)全程無菌處理。液氮罐
不同冷凍保護(hù)液對PBMNC的保護(hù)效果不同
PBMNC在-196℃液氮中儲存24個月后復(fù)蘇,鏡下觀察見細(xì)胞形態(tài)完整,圓形飽滿,PBMNC復(fù)蘇效率89.7%±3.82%,凍存液中含80%無血清培養(yǎng)基組和含80%自體血漿組比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P≥0.05)(表1)。
PBMNC凍存后誘導(dǎo)
AIL細(xì)胞的體外增殖及表型分析在倒置顯微鏡下觀察顯示,外周血單個核細(xì)胞呈懸浮生長,大小均勻,折光性一致,AIL經(jīng)4d培養(yǎng)后部分細(xì)胞明顯增大,可見細(xì)胞集落,胞核密度加強(qiáng),體積增大,胞膜光滑,未見突起,新鮮與凍存后的單個核細(xì)胞誘導(dǎo)的AIL在形態(tài)和表型上無明顯差別,增殖高峰期均在10-12d。
在培養(yǎng)過程中第14天,凍存組AIL細(xì)胞所占相對百分率由約2.3%上升約為10.4%,細(xì)胞數(shù)增加約1048倍,對照組AIL所占相對百分率由約2.3%上升為約11.3%,細(xì)胞數(shù)增加約1105倍。兩組之間在細(xì)胞增長倍數(shù)與AIL所占百分比無顯著差異(P>0.05)。
(表1)
效應(yīng)細(xì)胞的體外細(xì)胞毒活性
新鮮的與凍存的單個核細(xì)胞誘導(dǎo)的AIL對NK敏感(K562)或非敏感株細(xì)胞(HeLa)及貼壁或懸浮生長的腫瘤細(xì)胞均顯示出很強(qiáng)的殺傷活性,且該活性隨效靶濃度比的增加而增大,兩組間的細(xì)胞毒活性無顯著性差異(P>0.05)(表2)。液氮罐
圖2:比較各種冷凍和對照組之間的增殖和細(xì)胞表型。A:所有表型培養(yǎng)前。B:所有在冷凍組表型培養(yǎng)14 天后。C:所有對照組表型培養(yǎng)14 天后,D:所有增殖。E:自體免疫淋巴細(xì)胞。
(表2)