氣相液氮罐 短期儲存胚胎的可行性研究

【摘要】目的探討用氣相液氮運輸罐運輸小鼠胚胎和短時間保存小鼠胚胎的可行性。方法實驗使用4個小鼠品系（c57Bu6、B6D2、DBA／2、B10A），通過體外授精的方法得到2．細(xì)胞胚胎，用玻璃化冷凍法冷凍胚胎并儲存于液相液氮罐，然后轉(zhuǎn)移至氣相液氮運輸罐內(nèi)放置14 d再轉(zhuǎn)入液相液氮罐，zui后進(jìn)行復(fù)蘇移植。

結(jié)果4個品系的冷凍胚胎的復(fù)蘇率分別為69．7％、77．27％、77．59％、72．64％，對照組的相應(yīng)復(fù)蘇率為97％、84．38％、75％、71．43％，差異均不明顯（p<0．05）．4個品系胚胎移植后，除B10A這個品系的出生率差異顯著外（尸0．05）。結(jié)論在氣相液氮運輸罐短時間內(nèi)儲存胚胎或通過氣相液氮運輸罐進(jìn)行胚胎運輸是可行的。
[關(guān)鍵詞】小鼠胚胎；氣相液氮運輸罐；低溫保存

哺乳動物的胚胎超低溫保存zui早在小鼠獲得成功，1972年英國學(xué)者Whittingham首先成功地冷凍保存了小鼠胚胎，發(fā)明了胚胎的慢速冷凍保存方、法【1】。1985年RaU等【z】成功保存小鼠8細(xì)胞胚胎。此后，研究人員主要從事低毒性的玻璃化溶液、簡化冷凍程序和除去毒性抗凍劑等方面對玻璃化冷凍法加以改進(jìn)【}s1。

傳統(tǒng)的長期活體保種，不但需要大量空間、人力、物力，還可能發(fā)生遺傳漂變和遺傳污染【61。許多實驗室都通過冷凍保存小鼠胚胎的方法建立冷凍胚胎庫，因此引進(jìn)新的小鼠品系越來越多地通過引進(jìn)小鼠胚胎的形式進(jìn)行。

但傳統(tǒng)的液相液氮罐在運輸時有不少缺點，罐體體積大、分量重，溢出液氮容易凍傷人等。而新型的氣相液氮運輸罐是靠罐壁內(nèi)層的液氮層吸附大量液氮，并向外排出液氮蒸汽來使罐內(nèi)溫度達(dá)到一188℃至一194℃保存胚胎。它有著體積小分量輕的優(yōu)點，方便運輸，還可以降低胚胎之間交義污染。

本文通過小鼠冷凍2一細(xì)胞胚胎在氣相液氮運輸罐保存14 d后，進(jìn)行復(fù)蘇和移植，并和保存在傳統(tǒng)液相液氮罐胚胎的復(fù)蘇率和出生率相比較，來探討用氣相液氮運輸罐運輸或短期保存小鼠胚胎的可行性。