沒有液氮罐如何凍存細(xì)胞?不用液氮罐,在冰箱如何凍存4度/-20度/-70度各放多久啊?
如果不用液氮罐,可以用-70。我們是這樣做的,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至凍存管中,在-20放置半小時(shí)到一小時(shí)左右,預(yù)凍。之后放入-70中,我們嘗試過載-70中放置1年的細(xì)胞沒有問題,復(fù)蘇之后狀態(tài)尚佳。至于更長時(shí)間我們沒有嘗試過,但是老板說1年半沒問題,在國外他試過。
細(xì)胞凍遵循:慢凍速溶的原則。
還可以拿毛巾包著凍存管就可以直接放進(jìn)-70,即可以遵循細(xì)胞凍慢凍速溶的原則,又比較方便,不用先放-20,因?yàn)槭锹齼鲞M(jìn)去的,所以能更好的達(dá)到梯度凍存。
實(shí)際上,我認(rèn)為慢凍速溶原則是正確的。
慢凍是要給DMSO以滲透入細(xì)胞的時(shí)間,所以我的經(jīng)驗(yàn)是4度的半小時(shí)要保證,之后就基本上可以馬上凍起來也沒有什么關(guān)系了。
毛巾包裹法十分新穎,呵呵。不過,從原理上看,確實(shí)是值得嘗試的好方法,既保證了時(shí)間,又省去了搬來搬去的麻煩。
至于-80度的保存時(shí)間,我親眼所見,半年絕對沒有問題。
在4度的情況下,要看你是什么細(xì)胞了,如果是老鼠的細(xì)胞可以放1小時(shí)左右,其他細(xì)胞最多半小時(shí)(本人做過試驗(yàn)的);在-20度的情況下,老鼠的可以放1天左右,其他細(xì)胞半天,但其狀態(tài)不是很好了;在-70度的情況下,老鼠的細(xì)胞可以放1到2年,在此期間要復(fù)蘇一次看其生長情況,其他細(xì)胞最多一年了!
1. 選用對數(shù)生長期細(xì)胞,在收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。
2. 用常規(guī)方法將細(xì)胞消化下來,按(1~5)×106/ml濃度、懸浮于含有10% DMSO的小牛血清或生長液中。凍存的細(xì)胞數(shù)量要充分,因復(fù)蘇時(shí)接種的細(xì)胞數(shù)量應(yīng)比平常多一些。
3. 用吸管吸取細(xì)胞懸液,分裝于無菌安培管中(沒管1ml),嚴(yán)密封口,放入三層紗布小袋,注明細(xì)胞名稱和凍存時(shí)間,便于以后查找。
4. 凍存 當(dāng)前已有專用細(xì)胞凍存器,能精確地控制凍存溫度。在無凍存器的情況下,可用手工方法。從把安培懸液在液氮容器口開始,在30~40min內(nèi),下降到液氮表面,在停30min后,直接投入液氮中?;蛳葘才嘁迫胍旱蘅陬i部氣相中過夜,次日將紗布袋緩慢下降至液氮中,歷時(shí)3分鐘。在液氮中可長期保存。 若沒有液氮,可存于-80冰箱內(nèi),不過注意保存時(shí)間,比液氮短,可保存3個月左右。