注意事項(xiàng):
1、注意無(wú)菌操作
2、細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)融化凍存細(xì)胞速度要快,防止細(xì)胞損傷,細(xì)胞復(fù)蘇后的操作最好在適宜溫度中進(jìn)行,減少冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的毒性。
3、為了避免復(fù)蘇過(guò)程中細(xì)胞液中有冰晶的出現(xiàn),破壞細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。從液氮拿出來(lái),要快速丟入37度水浴,等細(xì)胞液剛剛化完取出,加培養(yǎng)液稀釋。
4、細(xì)胞放入水浴中注意用鑷子夾住細(xì)胞凍存管并在水浴中不時(shí)晃動(dòng),使其受熱均勻,并防止水浴時(shí)水進(jìn)入細(xì)胞凍存管污染細(xì)胞。打開(kāi)細(xì)胞凍存管之前要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞?br />
5、液氮一定的危險(xiǎn)性,打開(kāi)
液氮罐取出細(xì)胞時(shí),要注意防凍,戴防凍手套,防護(hù)眼睛。
6、如果凍存管密封不嚴(yán),液氮可被吸入。由于解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,將可能發(fā)生爆炸。復(fù)蘇過(guò)程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的原因:
1、凍存細(xì)胞時(shí)消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去鐵壁能力。
2、細(xì)胞凍存液的質(zhì)量不好也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
3、凍存液的量加的太多也不好。
4、凍存的時(shí)候把DMSO混均勻,會(huì)有一些影響,但不會(huì)太大。