牛精液冷凍保存是將精液進(jìn)行特殊處理,保存在超低溫下,以達(dá)到長(zhǎng)期保存的目的。通常采用液氮(-196℃)和干冰(-79℃)保存。
氣相液氮罐
牛精液冷凍保存的優(yōu)點(diǎn):使用不受時(shí)間、地域以及種用雄性動(dòng)物壽命的限制??沙浞痔岣呃寐省?br />
低溫保存細(xì)胞的原理,冷凍保護(hù)劑可以均勻充分地和細(xì)胞相接觸,保護(hù)效果好。對(duì)組織而言,保護(hù)劑只能作用于其表面,對(duì)深層細(xì)胞無(wú)法起到保護(hù)作用。為了提高組織的存活率,應(yīng)同時(shí)控制降溫的速率??刂平禍厮俾实穆俳禍乜梢允辜?xì)胞外溶液中的水結(jié)冰,導(dǎo)致細(xì)胞外溶液濃度升高,胞內(nèi)水向膜外滲出,在達(dá)到一定溫度時(shí),將組織置于灤低溫冰箱或液氮中凍存,可以減輕細(xì)胞內(nèi)結(jié)晶對(duì)細(xì)胞的損傷,保持細(xì)胞的活性。
冷凍
在裝有液氮的容器上置一銅紗網(wǎng),距液氮面2厘米左右。將平衡后的精液用滴管按一定量滴于銅紗網(wǎng),滴完最后一滴停3分鐘~5分鐘,當(dāng)精液顆粒顏色變白時(shí),立即浸入液氮,并將全部顆粒取下,收集于儲(chǔ)精瓶或紗網(wǎng)布袋內(nèi),并做好標(biāo)記,然后立即移入液氮罐中儲(chǔ)存。
解凍
將預(yù)先配制好的9%檸檬酸的溶液1毫升,放入干凈的小試管中,再置于40℃左右的溫水杯中,迅速取顆粒冷凍精液1粒放入試管。輕輕搖動(dòng)至化凍時(shí),從水杯中取出試管,接著檢查精液活力,即為合格品。
重視保精、快速解凍與鏡檢
1、根據(jù)液氮罐的性能要求,定期添加液氮,罐內(nèi)盛裝凍精的提筒不能露在液氮外面。
2、取精時(shí),盡可能用長(zhǎng)鑷子,切勿將提筒或紗布袋提到臨界線以上處(罐頂10厘米左右)。
氣相液氮罐
3、從液氮中取出細(xì)管凍精時(shí),要輕輕甩一兩下,將塑料細(xì)管的棉塞端放入35℃~40℃的溫水中,把封口端留在水外3厘米外,待管內(nèi)精液融化一半時(shí),立即取出備用。
4、解凍后的精液鏡檢時(shí),精子的活力不低于標(biāo)準(zhǔn)方可用于輸精,才能確保正常受精。
5、解凍后的精液應(yīng)立即輸配,不宜停放時(shí)間過(guò)長(zhǎng),應(yīng)做到現(xiàn)解凍,現(xiàn)輸精。