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              “復(fù)制”汪星人

              時(shí)間:2017-08-04 10:17來源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊:

                7月28日,克隆犬“龍龍”出生滿兩個(gè)月了。“龍龍”一出生就不簡單,因?yàn)樗侵袊桌耆灾髋嘤捏w細(xì)胞克隆犬,更是世界首例基因編輯克隆犬。該成果由生物院賴良學(xué)研究員帶領(lǐng)希諾谷公司科研團(tuán)隊(duì)及廣州生物院實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊(duì)完成。6月底,公安部南昌警犬基地將“龍龍”的血液樣本,與另一只比格犬“蘋果”進(jìn)行DNA檢測發(fā)現(xiàn),“龍龍”與“蘋果”同一認(rèn)定幾率大于99.99%,但排除與代孕母犬親子關(guān)系。同時(shí),中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院(簡稱生物院)賴良學(xué)研究員團(tuán)隊(duì),對“龍龍”與“蘋果”APOE基因進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn),其基因敲除方式也完全一致。

                “蘋果”耳朵上被取下極小塊的皮膚組織

                2016年底,世界首例動脈粥樣硬化疾病模型犬“蘋果”,在北京希諾谷公司誕生,它的名字源于A POE基因的諧音。研究團(tuán)隊(duì)的主要青年技術(shù)骨干王曉民介紹,“蘋果”出生后,研究人員從其耳朵上取下極小塊的皮膚組織,通過細(xì)胞體外培養(yǎng),保存在液氮罐中,留待后續(xù)發(fā)力。“任何植物或動物的一個(gè)細(xì)胞,都包含了整個(gè)生物體的遺傳信息,哪怕只是極小塊的皮膚組織,通過細(xì)胞增殖后,都可以做無數(shù)次的實(shí)驗(yàn)。”

                摸清犬的發(fā)情排卵規(guī)律,團(tuán)隊(duì)拿到了它的成熟卵母細(xì)胞,然后進(jìn)行克隆胚胎的構(gòu)建。其過程是,先去掉卵母細(xì)胞的細(xì)胞核,“遺傳物質(zhì)都在細(xì)胞核中”,而后“蘋果”的體細(xì)胞從液氮中復(fù)蘇,經(jīng)電融合,將其細(xì)胞核轉(zhuǎn)入去核的卵母細(xì)胞,再激活重構(gòu)的卵母細(xì)胞,克隆胚胎即構(gòu)建完備。下一步就是把克隆胚胎移植到代孕的子宮,30天后,給狗做B超,檢測顯示,“代孕媽媽”懷孕了。又過一個(gè)月,2017年5月28日,世界首例基因敲除體細(xì)胞克隆犬“龍龍”誕生。

                前后進(jìn)行了100多次實(shí)驗(yàn)

                最終攻克電融合等系列難題

                犬不同于小鼠、牛、羊等生物,它很特殊,一直以來被認(rèn)作是世界上最難被克隆的動物之一。2005年,世界首例體細(xì)胞克隆犬“史努比”在韓國誕生。此后,犬體細(xì)胞克隆技術(shù)就一直掌握在韓國人手中,從未被其他國家突破。“龍龍”的誕生,也標(biāo)志著中國成為繼韓國之后第二個(gè)獨(dú)立自主掌握犬體細(xì)胞克隆技術(shù)的國家,同時(shí),首次實(shí)現(xiàn)犬基因敲除體細(xì)胞克隆。

                除了摸清發(fā)情規(guī)律,獲得成熟的卵母細(xì)胞外,最難的是電融合。犬卵母細(xì)胞中富含脂類物質(zhì),顏色較深,黏性很大,顯微操作較困難,電融合的效率不高,“團(tuán)隊(duì)一直交流,不斷調(diào)整參數(shù)去試,最終才成功。”王曉民說。“前前后后共進(jìn)行了100余次實(shí)驗(yàn)。”王曉民說,實(shí)驗(yàn)最終攻克了電融合等一系列難題。“龍龍”的外觀跟“蘋果”看起來一樣,但因?yàn)?ldquo;龍龍”還小,目前在動脈粥樣硬化疾病上,尚沒有明確的表型。

                科普

                為何克隆犬此前鮮有聞之

                21年前,克隆羊“多莉”誕生,震動世界。而后,克隆牛、克隆豬等克隆動物,陸續(xù)誕生,但對克隆犬,此前卻鮮有聞之?克隆犬的首要難題是成熟卵母細(xì)胞的獲取。克隆包括三個(gè)主要的技術(shù)環(huán)節(jié),一是成熟卵母細(xì)胞的獲取及卵母細(xì)胞去核,二是克隆胚胎制備,三是克隆胚胎的移植。

                成熟卵母細(xì)胞的獲取有兩個(gè)途徑:體外成熟培養(yǎng)和體內(nèi)輸卵管沖卵獲取。比如豬、牛、羊等動物,可以去屠宰場獲取被屠宰牲畜的卵巢,從卵巢的卵泡中取出未成熟的卵母細(xì)胞,經(jīng)體外成熟培養(yǎng)后,便可用于后續(xù)的體細(xì)胞克隆。犬卵母細(xì)胞從卵泡中排出后處于G V期,是未成熟的卵子,需在輸卵管中停留48-72小時(shí)達(dá)到成熟期(MⅡ),而體外成熟培養(yǎng)效率極低,幾乎無法滿足克隆需求,因此只能通過體內(nèi)成熟的方法,獲取體內(nèi)成熟卵子,用于犬的體細(xì)胞克隆。

                犬的發(fā)情周期長達(dá)幾個(gè)月,發(fā)情期持續(xù)10-15天,但排卵后從卵母細(xì)胞成熟到老化的間隔時(shí)間較短。因此,獲取成熟且質(zhì)量好的卵母細(xì)胞窗口期非常短。這就要求準(zhǔn)確判斷犬的排卵及卵子成熟的時(shí)間,才能獲得處于理想狀態(tài)的卵子用于克隆胚胎的制備。而一旦錯過卵子成熟的時(shí)間,下次排卵,就要等半年甚至一年。一只狗平均排卵7-8枚,“取得早沒成熟,過晚又老化了。甚至同一批卵母細(xì)胞,有的成熟早,有的晚。”

                釋疑

                克隆犬可以用來做什么?

                王曉民說,目前在韓國,克隆犬有多種用途,首先是克隆優(yōu)良工作犬,如搜救犬,緝毒犬,導(dǎo)盲犬等,“這些犬有些特殊的技能,跟遺傳因素影響比較大,而訓(xùn)練起來又非常難。”據(jù)報(bào)道顯示,9·11事件中的“英雄”搜救犬,就曾被克隆出來??寺∫灿脕肀Wo(hù)瀕危犬科動物,如紅狼,草原胡狼,灰狼等。建立疾病模型后,再“復(fù)制粘貼”,克隆技術(shù)還能夠制造更多的疾病模型犬,用于人類疾病的研究。

                此外,犬是非常理想和成熟的實(shí)驗(yàn)動物,與人類在營養(yǎng)代謝、生理解剖等方面有很多相似點(diǎn),而且狗溫順,配合度高,“比豬、猴子等動物都更聽話。”賴良學(xué)說,目前團(tuán)隊(duì)在帕金森、自閉癥、糖尿病等方面都有研究,如果有需要,也可以建立狗疾病模型,進(jìn)行藥物篩選。王曉民說,目前國內(nèi)克隆動物主要用于科學(xué)研究,包括疾病模型、藥物研發(fā)、瀕危物種保存等。賴良學(xué)說,在“龍龍”出生后,不少警犬基地就打來電話,希望進(jìn)行合作。警犬珍貴,進(jìn)口又較貴,團(tuán)隊(duì)后續(xù)也希望通過將基因編輯技術(shù)與克隆技術(shù)相結(jié)合,批量培育嗅覺、奔跑能力更強(qiáng)的警犬。

                “復(fù)制版”寵物狗會保留原來的記憶嗎?

                對愛養(yǎng)寵物的人來說,最值得期待的就是克隆寵物犬了。有報(bào)道顯示,韓國有公司推出寵物克隆服務(wù),每只克隆小狗的價(jià)值約為10萬美元,價(jià)格不菲。“動物體細(xì)胞克隆研究相對較寬松,而人體細(xì)胞克隆研究是嚴(yán)格禁止的,包括早期體細(xì)胞克隆胚胎等。”王曉民說。

                克隆狗還留有原來的記憶嗎?性格愛好是否一致?王曉民說,克隆犬從基因?qū)用鎭碚f,和它的原始版本并無二致,但它的成長仍有后天因素的影響,性格、愛好、記憶,這些因素不可遺傳,被克隆狗的記憶只屬于自己,克隆狗也會有只屬于自己的記憶。王曉民查閱資料發(fā)現(xiàn),韓國方面有對克隆狗的健康狀況做過研究,包括克隆狗的體重、體形、顱骨尺寸、骨板、血常規(guī)等的檢測,與正常狗相比沒有差別。克隆的狗都很健康,沒有出現(xiàn)一些重大疾病,壽命與正常狗也相一致。

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